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ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
在測定時，ELISA試劑盒受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。
用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。
再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。
此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
操作步驟:
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，ELISA試劑盒未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內壓 實自封條，密封口袋，放回4℃。
2．空白孔加標準品和標本稀釋液，其余相應孔中加標本或不同濃度標準品（100ul/孔），用封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育90分鐘。
3．提前20分鐘準備生物素化抗體工作液。
4．洗板5次。
5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液（100ul/孔）。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱孵育60分鐘。
6．提前20分鐘準備酶結合物工作液。避光室溫（22-25 ） ℃ 放置。
7．洗板5次。
8．空白孔加酶結合物稀釋液，其余孔加入酶結合物工作液（100ul/孔）。用新封板膠紙封住反應孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。
9．打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。
10．洗板5次。
11．加入顯色底物（TMB）100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。
12．加入終止液100ul/孔, ELISA試劑盒混勻后即刻測量OD450值（3分鐘內）。
在儀器保存讀數結果并打印一份紙質結果。
13．實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結束。
建議保存酶標板框，以備下次或者今后試驗使用。