日韩视频欧美视频_在线观看亚洲精品视频_久久青草久久_欧美成人第一页

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法
上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法
更新時間:2019-08-28   點擊次數:1521次

上海晶抗生物所售單克隆抗體中一般常見篩選方法:

ELISA:酶聯免疫吸附實驗,通常用間接法。

WB:免疫蛋白印跡。
ICC:免疫細胞化學。
IHC:免疫組織化學。

  單克隆抗體由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。上海晶抗生物根據單克隆抗體實驗中細胞融合辦法給出具體步驟:歡迎參考!

(一)融合劑
  細胞融合的方法有物理法,如電融合、激光融合,化學融合法和生物融合法,如仙臺病毒,此處例舉化學融合法中的一種即聚乙二醇融合法。

  聚乙二醇(PEG),在分子量為200~700時,呈無色、無臭的粘稠狀液體,分子量大于1 000時,呈乳白色蠟狀固體,能溶于水、乙醇及其他許多有機溶劑,對熱穩定,與許多化學藥品不起作用。用作細胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4 000者,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。50%濃度,pH偏堿時融合效應*。

  也有采用30%~50%濃度的PEG加上10%二甲亞砜。

  不同批號的PEG,即使分子量相同,但融合率卻有明顯差異,選用時必須注意。每批都必須進行細胞毒性試驗后方可應用。要買高純度的,一般選供氣相色譜用的PEG。

(二)融合過程

  融合的方法很多,常用的有轉動法和離心法。

  融合時脾細胞和骨髓瘤細胞的比例為1:1至10:1不等。3:1或5:1*為常用。

1.試劑與材料

(1) 供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。

(2) 1640培養液100ml。

(3) *1640液100ml。

(4) 2.5%FCS-1640液50ml。

(5) HAT培養液100ml。

(6) 50%PEG:取分子量4 000,高純度的(日本進口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高壓滅菌,使用前用預熱于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚紅檢查pH,一般不必調pH。如pH有改變,可用HCl或NaHCO3調整。

(7) 10ml和50ml的滅菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培養盤。

2.操作方法

⑴ 準備好脾細胞。

⑵ 在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞,并加入50ml 2.5%FCS-1640液。

⑶ 室溫400g離心3min,使細胞沉淀。

⑷ 移去上清液。

⑸ 輕敲管底部,使沉淀流動,把沉淀管放于40℃水浴中,使其達融合溫度。

⑹ 加預熱至40℃的50%PEG 0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見有顆粒出現,滴加過程要求持續2min。

⑺ 加1ml1640液,邊加邊搖動,持續1min。

⑻重復⑺一次。

⑼ 加1ml 1640液,邊加邊搖動,持續0.5min。

⑽ 重復⑼一次。

⑾ 加1640液15ml。

⑿ 室溫,400g離心1min,使細胞沉淀。

⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的*1640液。

⒁ 往已于前一日種有飼養細胞的40孔塑料培養盤中滴加融合的細胞液,每孔1滴(約0.05ml)。

⒂ 輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。

⒃ 第3、6、9、10日換入含HAT的*1640培養液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細胞吸出,根據需要加入適量的飼養細胞。

⒄ 于第12、15日加入含有HAT的*1640培養液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數雜交瘤細胞在10~20天內出現,但也有在1個月左右才能出現的。雜交瘤細胞出現后,吸取上清液,檢查抗體。

⒅ 對繼續生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中,依情況取消HAT液和*1640液而代之以10%FCS-1640液。同時保存于液氮和進行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產生抗體細胞的變異和丟失。

(三)細胞融合的關鍵

1.技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。

2.融合試驗*的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。

我司幾千種elisa試劑盒被全國近萬家科研單位和醫療機構應用,發表論文達數萬篇。

公司下設產品研發部、生產部、質檢部、銷售部、發貨部、財務部、后勤部,配備有大型的實驗室,各種生化儀器,ELISA試劑盒我們可以全程免費代測。我們的產品:質量保證、*、供貨及時、服務周到。

上海晶抗生物工程有限公司
  • 網站首頁
  • 關于我們
  • 新聞動態
  • 產品中心
  • 技術文章
  • 榮譽資質
  • 在線留言
  • 聯系我們

上海晶抗生物工程有限公司

地址:上海市金山工業區亭衛公路6558號9幢2441室

版權所有:上海晶抗生物工程有限公司  備案號:滬ICP備16026504號-5  總訪問量:654091  站點地圖  技術支持:智慧城市網  管理登陸

日韩视频欧美视频_在线观看亚洲精品视频_久久青草久久_欧美成人第一页
亚洲欧美日韩国产成人精品影院| 亚洲国产小视频在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 欧美69wwwcom| 欧美成人精品在线观看| 日韩一区二区精品视频| 日韩午夜在线电影| 国产精品国产a级| 久久激情五月婷婷| 久久久久久九九九九| 亚洲人体1000| 在线综合亚洲| 国内偷自视频区视频综合| 欧美成人午夜激情在线| 欧美日本亚洲| 久久精品视频亚洲| 欧美h视频在线| 小黄鸭视频精品导航| 久久久午夜视频| 宅男66日本亚洲欧美视频| 午夜亚洲视频| 99精品国产高清一区二区| 亚洲欧美一区在线| 99精品视频免费全部在线| 亚洲欧美清纯在线制服| 亚洲福利在线看| 中日韩美女免费视频网址在线观看| 国产午夜精品视频免费不卡69堂| 欧美黄色一区| 国产视频在线一区二区| 亚洲国产导航| 国产欧美精品一区二区三区介绍 | 欧美一级片一区| 亚洲精品影院| 久久成人精品无人区| 一区二区三区精品国产| 久久久久久久久久久一区| 亚洲在线不卡| 欧美激情导航| 欧美/亚洲一区| 国产免费成人在线视频| 亚洲裸体视频| 最新中文字幕亚洲| 久久国产精品久久久久久久久久 | 一区二区三区视频在线| 久久日韩粉嫩一区二区三区| 性色av一区二区三区在线观看| 欧美大片网址| 欧美国产亚洲另类动漫| 国产一区二区| 小黄鸭精品aⅴ导航网站入口| 一区电影在线观看| 欧美激情精品久久久六区热门 | 99精品免费视频| 欧美国产先锋| 欧美电影免费观看网站| 激情久久久久| 久久www成人_看片免费不卡| 欧美在线视频一区| 国产精品视频一区二区三区 | 久久国产精品久久w女人spa| 国产精品成人在线| 99成人免费视频| 一区二区三区高清在线观看| 欧美日韩国产精品自在自线| 亚洲大胆人体视频| 亚洲欧洲在线播放| 欧美成人午夜激情在线| 亚洲国产裸拍裸体视频在线观看乱了中文| 激情久久五月天| 久久综合网色—综合色88| 免费在线成人| 亚洲精品在线看| 欧美经典一区二区三区| 日韩视频不卡中文| 午夜免费日韩视频| 国产亚洲在线| 久久久另类综合| 亚洲福利av| 亚洲一区二区三区精品在线观看| 欧美日韩一区二区欧美激情| 亚洲私人影吧| 久久久久久亚洲精品中文字幕 | 国语自产精品视频在线看抢先版结局| 欧美在线影院| 亚洲成人在线网| 亚洲网站在线播放| 国产精品自拍小视频| 久久九九免费| 亚洲三级电影在线观看| 亚洲欧美一区二区视频| 国模私拍一区二区三区| 久久爱另类一区二区小说| 精品1区2区| 欧美日韩国产片| 亚洲欧美在线一区二区| 欧美电影电视剧在线观看| 亚洲一区二区三区中文字幕在线| 国产美女精品在线| 欧美成人免费在线观看| 亚洲综合精品一区二区| 亚洲第一级黄色片| 午夜伦理片一区| 亚洲精品你懂的| 国产麻豆精品theporn| 欧美 日韩 国产 一区| 亚洲午夜电影网| 亚洲国产aⅴ天堂久久| 欧美一进一出视频| 亚洲精品小视频在线观看| 国产精品一区二区久久久| 欧美不卡高清| 欧美在现视频| 亚洲视频在线观看网站| 欧美肥婆bbw| 久久久久久久久一区二区| 亚洲一区二区在| 亚洲精品1234| 精品动漫一区二区| 国产精品欧美一区喷水| 欧美日韩 国产精品| 久久婷婷国产综合尤物精品 | 免费的成人av| 久久性天堂网| 欧美影院久久久| 亚洲一区区二区| 99精品免费视频| 亚洲精品国精品久久99热| 黑人巨大精品欧美一区二区小视频 | 免费欧美电影| 久久午夜精品一区二区| 欧美一区日韩一区| 亚洲综合电影| 亚洲一区日韩| 一区二区三区欧美| 日韩视频在线一区二区三区| 亚洲电影专区| 在线免费不卡视频| 极品中文字幕一区| 极品少妇一区二区三区精品视频| 国产精品一区一区三区| 国产精品久久久久久超碰| 国产精品av一区二区| 欧美午夜性色大片在线观看| 欧美日韩午夜视频在线观看| 麻豆成人在线播放| 久久久蜜桃一区二区人| 久久亚洲高清| 欧美国产亚洲精品久久久8v| 亚洲电影自拍| 亚洲欧洲一二三| 99国产精品国产精品毛片| 一区二区三区免费观看| 中文精品视频| 欧美在线不卡视频| 久久激情五月婷婷| 久久综合电影| 欧美人与禽猛交乱配视频| 欧美日韩成人一区二区| 欧美天堂亚洲电影院在线观看| 欧美亚男人的天堂| 国产视频一区欧美| 亚洲国产高清aⅴ视频| 亚洲麻豆国产自偷在线| 亚洲尤物精选| 久久综合九色欧美综合狠狠| 亚洲第一成人在线| 一道本一区二区| 久久成人亚洲| 欧美精品二区三区四区免费看视频| 欧美日韩在线一区| 国产日韩精品一区二区三区| 精久久久久久| 亚洲小视频在线| 久久久91精品国产| 91久久精品一区| 销魂美女一区二区三区视频在线| 美女任你摸久久| 国产精品大全| 亚洲第一色在线| 亚洲视频在线视频| 欧美.日韩.国产.一区.二区| aⅴ色国产欧美| 久久理论片午夜琪琪电影网| 欧美日韩亚洲视频| 精品999在线播放| 亚洲欧美日韩一区二区| 欧美sm视频| 西西人体一区二区| 欧美日本国产在线| 精品成人一区| 欧美一区二区三区久久精品| 欧美黑人在线播放| 欧美尤物一区| 欧美视频一区二区三区| 亚洲欧洲一区二区三区在线观看| 久久精品国产2020观看福利| 亚洲老板91色精品久久| 美女精品在线| 精品成人久久|