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ELISA試劑盒大家在實驗中多多少少會有些問題出現，復孔的稀釋步驟也不例外。那么ELISA檢測實驗中復孔的稀釋到底有多關鍵呢？近日，有位客戶來電表明了自己的實驗疑惑：“設計ELISA復孔檢查時，是對同一個樣品作兩次稀釋，再分別加到板上的兩個孔，還是只稀釋一次，然后吸取兩次分別加到兩個孔？前者似乎把稀釋時的誤差也考慮到了，但做出來的結果兩個孔相關挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法？”

為了減小誤差，是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問，上海基免生物科技有限公司技術人員是這樣解說的：
1. 前者測的是稀釋和移液的誤差，后者只有移液誤差。
2. 一般都是稀釋一次，分兩孔吧。同濃度的分復孔。
3. 由于是從同一原液稀釋，一般不考慮稀釋誤差(稀釋誤差是存在的)，都是稀釋到想要的倍數直接分孔(而不是一一稀釋，這樣可以使稀釋誤差減小)。
4. 復孔是為了排除移液體積，板的影響，以及其他系統誤差的，要求復孔的濃度是一致的。稀釋后分孔能滿足此要求，一一稀釋不能。
    
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